微生物培養(yǎng)操作及注意事項
發(fā)布時間：2022-08-04
實驗原理
細菌和其它生物一樣，大多數(shù)屬異養(yǎng)菌，必須從周圍環(huán)境中攝取營養(yǎng)，進行新陳代謝及生長繁殖等生命活動。人為的提供細菌生長繁殖所需的營養(yǎng)物質（適宜的培養(yǎng)基）和創(chuàng)造適合細菌生長繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等，能使細菌在體外迅速生長繁殖。
細菌生長繁殖的條件：1充足的營養(yǎng)物質2適宜的溫度3合適的酸堿度（pH）4必要的氣體環(huán)境
培養(yǎng)基配制
正確配制培養(yǎng)基是微生物培養(yǎng)的基礎步驟之一，實驗室使用各種基礎成分制備培養(yǎng)基時，應按照配方準確配制，并記錄相關信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
常見的滅菌方法有：1化學物質滅菌：藥物與微生物細胞中的成分反應，使蛋白質變性、酶失活；使用范圍：器皿、雙手和實驗室、無菌室的環(huán)境滅菌，不能用于培養(yǎng)基滅菌；常用的有酒精、來蘇爾等。
2輻射滅菌：原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學反應造成菌體死亡；常用的有紫外線、X射線和γ射線，用于室內空氣及器皿表面滅菌。
3干熱滅菌：原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質變性和電解質濃縮作用而殺滅微生物；常用灼燒和電熱箱加熱，140-180℃ 1-2小時，適于對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。
4濕熱滅菌：原理是直接用蒸汽滅菌，蒸汽在冷凝時能釋放出大量潛熱，蒸汽具有強大的穿透力，破壞菌體蛋白和核酸的化學鍵，使酶失活，微生物因代謝障礙而死亡，水煮常壓滅菌：100℃，或飽和蒸汽滅菌：一般121℃，30分鐘，適合培養(yǎng)基和發(fā)酵設備滅菌。
5過濾除菌：除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌，方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜，用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。
接種方法
將微生物接到適于他生長的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內的過程叫做接種，接種方法有以下幾種：1劃線接種：最常用的接種方法，即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動，就可達到接種的作用，常用的接種工具有接種環(huán)、接種針等，在斜面接種和平板接種中常用此法
2三點接種：在研究霉菌形態(tài)時常用此法，即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落后，來觀察、研究它們的形態(tài)
3穿刺接種：在保藏厭氧菌或研究微生物的動力時常采用此法，做穿刺接種時，用的接種工具是接種針，用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底做支線穿刺
4澆混接種：將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的；待平板凝固之后，置合適溫度下培養(yǎng)，就可長出單個的微生物菌落
5涂布接種：與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落
6液體接種：從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中，或者從液體培養(yǎng)物中，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中，都可稱為液體接種
7注射接種：該法是用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動物中，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來預防某些疾病
8活體接種：活體接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種于活的生物體內才能生長繁殖，所用的活體可以是整個動物、某個離體活組織、發(fā)育的雞胚，接種的方式是注射、拌料喂養(yǎng)等
微生物保藏
根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度， 使細胞基本處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以減低菌種的變異率；低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都有抑制微生物的代謝作用。菌種保藏步驟：1挑選特征典型的純菌菌落2確定保藏的合適菌體形態(tài)3選擇最適宜的保藏方法4定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發(fā)生變化，若有變化，須改變保藏方法；保藏期滿 應及時進行移種
菌種保藏方法：1瓊脂斜面低溫保存法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時間培養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好，放在4℃左右的冰箱中保藏，每隔2~3個月移種一次，繼續(xù)進行保藏。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年～一年，有的甚至更長時間。2液體石蠟保存法：將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中，培養(yǎng)好備用。取液體石蠟裝在試管中，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或110~ 170 ℃烤箱中1 ~ 2 h或干燥器內除去液體石蠟中的水分，將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端 1cm為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。
上一條：高壓反應釜使用的注意事項
